Ko conseguiu uma sequência de três birdies consecutivos nos últimos nove buracos, numa volta sem bogeys, que a deixou com um total de oito abaixo do par após 36 buracos no Lake Nona Country Club, em Orlando, Flórida.
A jogadora de 28 anos, vencedora de três majors, foi igualada no topo da tabela por Lottie Woad, de Inglaterra, que depois de um 67 inicial, terminou a segunda volta com 69 pancadas, três abaixo do par.
Ko afirmou que transportou o embalo de uma sólida primeira volta, disputada na quinta-feira, para a segunda ronda.
"Senti que joguei de forma bastante consistente no geral", disse Ko. "Ontem até me surpreendi um pouco. Não sabia bem o que esperar, mas vi muitas coisas positivas e acho que consegui manter esse embalo até hoje. Estou numa boa posição para enfrentar os desafios que aí vêm."
Já a jovem promessa inglesa Woad, que só se tornou profissional no ano passado depois de ter alcançado o terceiro lugar no Evian Championship enquanto amadora, somou quatro birdies e apenas um bogey no seu 69, três abaixo do par.
No entanto, Woad ficou frustrada por não ter conseguido um resultado ainda melhor, depois de falhar vários putts de birdie relativamente acessíveis.
"Tive muitos putts de cerca de dois metros para birdie e simplesmente não os consegui concretizar, o que foi bastante irritante", afirmou a jogadora de 22 anos.
Ko e Woad lideram com um golpe de vantagem sobre Amy Yang, da Coreia do Sul, e Nasa Hataoka, do Japão.
Hataoka brilhou na primeira volta com um resultado de seis abaixo do par na quinta-feira, mas teve de contentar-se com um 71 na sexta-feira, numa exibição mista que incluiu três birdies e dois bogeys.
Ingrid Lindblad, da Suécia, e as sul-coreanas Hwang You-min e Kim A-lim seguem logo atrás, com um total de seis abaixo do par.
Jeeno Thitikul, número um mundial da Tailândia, está a três pancadas da liderança, com cinco abaixo do par, juntamente com Nelly Korda e a também tailandesa Chanettee Wannasaen.