O dorsal número seis, primeiro camisola amarela das últimas quatro edições e também das de 2016 e 2018, aparece na ordem da partida do prólogo como último ciclista a sair para a estrada, na Avenida de Altino Coelho, às 17:25, um minuto depois de Iúri Leitão (Caja Rural), campeão olímpico de madison em Paris-2024.
O russo Artem Nych (Anicolor-Tien21), campeão em título e único antigo vencedor presente, inicia o seu exercício às 17:09, dois minutos antes de Gonçalo Leaça (Credibom-LA Alumínios-MarcosCar), o quarto da passada edição.
António Carvalho (Feirense-Beeceler), o terceiro classificado de 2022 e 2023, parte às 17:14, com o também português Diogo Narciso (Credibom-LA Alumínios-MarcosCar) a ser o primeiro a fazer-se à estrada, às 15:35 minutos, para completar o percurso de 3,4 quilómetros com final na Avenida Luís de Camões.
Os 111 ciclistas inscritos na 86.ª edição, que termina em 17 de agosto em Lisboa, iniciam o prólogo com um minuto de diferença entre si.